组织病理学

病理组织学属于形态学检验，组织病理学是将病变组织制成厚约数微米的切片，经不同方法染色后用显微镜观察其细微病变，对疾病做出病理学诊断。组织病理分析是检验大多数动物模型实验成功与否的金标准。病理学基本检验技术包括组织固定、石蜡制片、苏木素-伊红染色及常用特殊染色技术。

「操千曲而后晓声，观千剑而后识器」，阅读下文自测病理组织学知识你知多少 ～

一、石蜡切片与冰冻切片

（一）石蜡切片制备流程

（二）冰冻切片制备流程

TIPS：石蜡切片和冰冻切片如何选择?

1、冰冻切片优点制片时间短，时间快；缺点保存时间短；
2、石蜡切片对组织的形态保存比冰冻切片好, 标本可以长期保存；
3、常规染色，组化优先推荐做石蜡切片；
4、免疫荧光推荐用冰冻切片 (石蜡有自发荧光)；
5、脂质染色、ROS 染色、 ATP 染色，胆固醇染色推荐做冰冻切片。

二、HE 染色

苏/木/精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称 HE 染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。HE 染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
 

图注： HE 染色图
 

图注：HE 染色实验流程图
 

HE 染色过程可能出现问题：

1、HE 染色最常见的红蓝失调

偏蓝色：苏木素染色过深，分化不够；伊红试剂过期；伊红染色时间太短，分化过度。
偏红色：苏木素染色过浅，分化过度；组织固定不佳，细胞核不着色；脱蜡不彻底，苏木素染不上；苏木素氧化成熟不够；伊红染色过深，分化不足。

2、HE染色后出现的大白色斑块或斑点

答：脱蜡前烤片温度偏低，时间过短，蜡未完全融化；切片在脱蜡溶剂中停留时间过短；脱蜡溶剂使用太久，得更新。

3、细胞核染色过浅，颜色暗淡

答：切片在苏木素染液中停留过短，或苏木素过度氧化失效，或分化时间太长。对策：重新染色。将组织切片放入 0.01% 氢 (氧) 化 (钠)、0.5% AN 水、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液，每个 3-5 min 即可，接着重新染色。可以适当地组织的嗜碱性以增强核染色，如 Zenker 液固定的切片可放入 5% 碳酸氢钠溶液中 3 h，自来水冲洗 5-10 min 染色，或 Bouin 液固定的切片可放入 5% 碳酸氢钠溶液中 1 h，自来水冲洗 10 min 染色。

4、细胞核染色过深，胞浆着蓝色

答：切片在苏木素染液中停留过长；或切片太厚；或分化时间太短。这种情况首先镜下看看切片厚度 (最佳厚度 1-2 层细胞核)，要么重新染色，要么重新制片。

5、细胞核呈棕红色改变

答：苏木素染液过度氧化；或苏木素染色后反蓝不足导致。应该立即更换苏木素染色液。或在流动自来水 (一般自来水 PH7.5-7.8)，或在稀释的氨 (an) 水溶液，或在 0.2% 碳酸氢钠中适当浸泡，这些步骤均可一定程度地加强苏木素染色后的反蓝效果。

6、伊红染色较淡

答：伊红的 PH 改变了 (PH 可能已大于 5)；或反蓝液体未漂洗干净，残留后影响胞浆嗜酸性染色；或者切片太薄并且在随后的脱水步骤停留过久。对策：检查伊红染色液 PH，可采用乙酸调至 4.6-5.0。根据以上提示，调整实验步骤。


三、免疫组化

免疫组化是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术。
 

图注：免疫组化图

图注：免疫组化实验流程图
 

图注：其他染色图

四、各类组织常见染色方法及指标